Viabilidade de células pró-embriogênicas e suspensão celular de Murici-pequeno

Abstract

O Murici-pequeno (Byrsonima intermedia A. Juss) é uma espécie medicinal e frutífera do Cerrado que apresenta dificuldades de propagação por meios convencionais, sendo assim, o desenvolvimento de metodologias alternativas de propagação para essa espécie se faz necessário. Estudou-se nesse trabalho os efeitos residuais da desinfestação de sementes com uma solução de NaOCl, em diferentes pHs e tempos de exposição, no crescimento das plântulas in vitro. A partir de segmentos foliares das plântulas cultivadas in vitro, foram produzidos calos em meio MS com 4,52 μM de 2,4-D e submetidos a três sucessivos subcultivos de 60 dias cada. Para cada subcultivo foi avaliado o potencial embriogênico com os corantes Carmim-acético (C.A.) e Azul-de- Evans (A.E.). Também foram usados os corantes FDA e CTT para analisar a viabilidade de calos no decorrer dos subcultivos. Por fim foi estabelecida uma suspensão celular e analisado seu crescimento através da contagem de células com auxilio de uma câmara de Neubauer. O crescimento das plântulas foi afetado pela variação do pH e tempos de exposição ao NaOCl. Os testes citoquímicos por meio da dupla coloração com C.A. e A.E permitiram a caracterização do potencial embriogênico para os três subcultivos através da análise das áreas coloridas por estes corantes. A maior viabilidade de calos observada pelo teste de CTT ocorre no 25o dia de cultivo. Quanto ao FDA no 25o, 29o e 21o dia de cultivo foi observado o maior número de células viáveis para primeiro, segundo e terceiro subcultivos, respectivamente. A análise da suspensão celular revelou que a utilização de ANA promoveu o maior número de células viáveis para o terceiro subcultivo.

The Murici-pequeno (Byrsonima intermedia A. Juss) is a fruitful medicinal species of Cerrado which presents difficulties to be propagated by conventional methods. This fact makes necessary the development of alternative methodologies of propagation for this species. In this work it was studied the in vitro seedlings growth according to residual effects of seeds disinfestation with NaOCl solution, using different pH and periods of exposition. It was produced callus from in vitro seedlings leaf segments cultivated in MS medium with 2.4- D (4.5 μM). These were subcultivated for three times, with 60 days each. For each subcultivation it was assayed the embryogenic potential using the dyes Aceto-carmine (A.C.) and Evans-blue (E.B.). In addition, FDA and CTT dyes were also used to analyze the callus viability during the subcultivation periods. Finally, a cell suspension was established and its growth analyzed by the cells counting using a Neubauer chamber. Seedlings growth was affected by the pH variation and exposition periods to NaOCl. The cytochemical tests by double staining with A.C. and E.B. allowed the characterization of the embryogenic potential for the three subcultivations by analyzing the areas stained with these dyes. Using CTT, higher callus viability was observed at the 25o day of cultivation. Using the FDA test at the 25o, 29o and 21o days of cultivation, higher number of viable cells for the first, second and third subcultivation, respectively, were observed. The cell suspension analysis showed that use of NAA promotes a higher number of viable cells in the third subcultivation.