Transformação genética de híbridos de urograndis

Abstract

O eucalipto é uma das espécies lenhosas mais plantadas devido à demanda, principalmente, nos projetos industriais do segmento de papel e celulose. Com isso, nas últimas duas décadas vários grupos de pesquisa relataram diferentes protocolos de transformações genéticas e tentativas para o desenvolvimento de eucaliptos transgênicos. As plantas transgênicas representam uma ferramenta de grande importância para estudos moleculares, genéticos, bioquímicos e fisiológicos além da expressão e silenciamento permitindo a produção de novos genótipos de plantas. A eficiência da transformação depende da combinação de métodos eficientes e técnicas de regeneração. A transformação via Agrobacterium rhizogenes tem sido utilizada como uma ferramenta para estudos funcionais de genes. Com este trabalho propõe-se um processo de transformação por esse método com alta eficiência utilizando um híbrido de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla. A partir do método de infiltração a vácuo, durante 4 min a 400 mmHg, com a cepa de Agrobacterium rhizogenes MSU440 obteve-se uma taxa de 70% de plantas com raízes transformadas. Para o processo de transformação de calos foram testados quatro métodos diferentes, três constituíam-se de métodos indiretos via Agrobacterium tumefaciens, agitação, infiltração a vácuo e sonicação e outro método direto utilizando bombardeamento. O processo de infiltração a vácuo mostrou-se o mais eficiente com 1,46% de plantas transformadas. As transformações foram realizadas com o gene repórter gfp (Green Fluorescent Protein) que provou ser ideal para estabelecer protocolos de transformação genética em eucalipto.

Eucalyptus is one of the most planted woody species due to its demand, especially from projects in the paper and cellulose industrial segment. Thus, in the last two decades, many research groups reported different genetic transformation protocols and attempts to develop transgenic eucalyptus. The transgenic plants represent a tool of great importance for molecular, genetic, biochemical and physiological studies, in addition to the expression and silencing, which allows the production of new plant genotypes. The efficiency of the transformation depends on the combination of efficient methods and regeneration techniques. The transformation via Agrobacterium rhizogenes has been used as a tool for functional studies of genes. This work proposes a transformation process through this highly efficient method using a Eucalyptus grandisx Eucalyptus urophylla hybrid. We obtained a 70% rate of plants with transformed roots using a vacuum infiltration method during 4 min at 400 mmHg, with MSU440 Agrobacterium rhizogenes strain. For the callus transformation process we tested four different methods, three indirect via Agrobacterium tumefaciens, agitation, vacuum infiltration and sonication, and the other direct using bombardment. The vacuum infiltration process was shown to be the most efficient with 1.46% of transformed plants. The transformations were done with the gfp (Green Fluorescent Protein) reporter gene which proved to be ideal to establish genetic transformation protocols in eucalyptus.