Micropropagação de Ocotea porosa (Ness ex Martius) Liberato Barroso (Imbuia)

Abstract

Ocotea porosa conhecida como imbuia, é uma espécie florestal de importância econômica em risco de extinção. O objetivo deste trabalho foi avaliar a germinação in vitro de embriões zigóticos e estabelecer um protocolo de micropropagação da imbuia. A germinação in vitro foi testada em meio de cultura MS/2, suplementado com sacarose (15; 30; 60 ou 90 gL -1 ), diferentes formulações de sais (MS, WPM, MS/2 e WPM/2) ou diferentes concentrações de carvão ativado (0; 1; 2 e 3 gL -1 ). Para micropropagação, brotações apicais de mudas de um ano de idade foram desinfestadas, estabelecidas in vitro e utilizadas nos experimentos de multiplicação. Nessa etapa o meio de cultura MS foi acrescido de BAP (0; 2,5; 5 ou 10 μM) ou de combinações de BAP + CIN (0+0; 1,25+1,25; 2,5+2,5 e 5+5 μM). O alongamento das brotações foi avaliado em meio de cultura MS, com concentrações reduzidas de BAP (0; 0,5; 1 ou 1,5 μM), com CIN (0,5 ou 1 μM) ou carvão ativado (0,5; 1; 2 ou 3 gL -1 ). A indução de raízes foi avaliada em meio de cultura WPM/2 ou MS/2, acrescido de AIB (0; 1,25; 2,5; 5 ou 10 μM) durante 7 dias ou com tratamento pulso por 10 minutos em soluções de AIB (0; 2,5; 5 ou 10 mM), seguido de transferência para meio sem regulador vegetal. As mudas foram plantadas em diferentes substratos: Plantmax ® ; Plantmax ® +carvão vegetal; Plantmax ® +casca de arroz carbonizada; Plantmax ® +casca de arroz carbonizada+terra peneirada e mantidas em casa-de-vegetação. A germinação in vitro da imbuia mostrou ser viável porque acelerou a obtenção de mudas. Os meios de cultura MS/2, suplementados com 60 e 90 gL -1 de sacarose, proporcionaram as maiores porcentagens de germinação, com 56,3 e 59,4% respectivamente. Das formulações de meio de cultura testadas, a do MS/2 apresentou a maior porcentagem de germinação (74,2%). A adição de carvão ativado no meio de cultura MS/2 foi eficaz na germinação de imbuia. Foi estabelecido um protocolo de micropropagação de imbuia a partir de brotações juvenis. A multiplicação foi mais eficiente em meio de cultura MS, suplementado com 5 μM de BAP (5,3 brotações por explante, após quatro subcultivos). As combinações de 2,5 μM de BAP + 2,5 μM de CIN proporcionaram 3,6 brotações por explante, após quatro subcultivos. Para o alongamento, a adição de 1 μM de BAP proporcionou brotações mais longas (79,3%). A indução das raízes em meio de cultura WPM/2, com 2,5 μM de AIB proporcionou 57,5% de enraizamento e no meio de cultura MS/2 com 10 μM de AIB, obteve-se 68,7% de enraizamento. O tratamento pulso por 10 minutos em solução de 5 e 10 mM de AIB, proporcionou 61,1 e 62,5% de brotações enraizadas respectivamente. O meio de cultura suplementado com carvão ativado para o desenvolvimento de raízes não favoreceu o enraizamento. A maior porcentagem de plantas sobreviventes foi obtida com o substrato Plantmax ® + casca de arroz carbonizada (56,7%) após quatro semanas. A micropropagação da imbuia foi viável, porém necessita de mais estudos para aumentar a porcentagem de sobrevivência das plantas durante a aclimatização.

Ocotea porosa is known as “imbuia”. It is a forest species of economical importance and in risk of extinction. The purpose of this work was to evaluate the germination in vitro of zygotic embryos and to establish a micropropagation protocol for this species. The germination in vitro was closse on MS/2 culture medium supplemented with sucrose (15; 30; 60 or 90 gL -1 ), different salts formulations (MS; WPM; MS/2 or WPM/2) or different concentrations of activated charcoal (0; 1; 2 or 3 gL -1 ). For micropropagation, one-year-old apical shoots were disinfected, established in vitro and used in experiments of multiplication. In this stage, the MS culture medium was supplemented with BAP (0; 2,5; 5 or 10 μM) or combinations of BAP+KIN (0+0; 1,25+1,25; 2,5+2,5 and 5+5 μM). The shoots elongation was evaluated in culture medium MS, with low concentrations of BAP (0; 0,5; 1 or 1,5 μM), of KIN (0,5 or 1 μM) or activated charcoal (0,5; 1; 2 or 3 gL -1 ). For the induction of roots, WPM/2 or MS/2 culture medium was supplemented with IBA (1; 1,25; 2,5; 5 or 10 μM) were tested during 7 days. Pulse treatments for 10 min in solutions of IBA (0; 2,5; 5 or 10 mM), followed by transfer to a culture medium without growth regulator were also applied. The shoots were planted in greenhouse with substrates Plantmax®; Plantmax®+charcoal (3:1); Plantmax®+rind rice carbonized; Plantmax®+rind rice carbonized+land, kept in greenhouse. The in vitro germination of imbuia was viable and accelerated the development of plantlets. The MS/2 culture medium, supplemented with 60 or 90 gL -1 sucrose, provided a higher percentage of germination 56.3 and 59.4% respectively. The MS/2 medium provided the largest percentage of germination (74.2%). The addtion of activated charcoal to the MS/2 culture medium was efficient for embryos germination. A micropropagation protocol of imbuia from young sprouts was stablished. The multiplication rate was higher in MS culture medium, supplemented with 5 μM of BAP (5.3 shoots) after four subcultures. The combinations of 2.5 μM BAP + 2.5 μM KIN provided 3.6 shoots, after four subcultures. For shoot elongation 1 μM of BAP gave larger shoots (79.3%). In WPM/2 culture medium with 2.5 μM of IBA 57.5% of shoots were rooted and with MS/2 culture medium and 10 μM IBA rooting rate was 68.7%. Pulse treatment for 10 min in solutions of 5 or 10 mM IBA provided 61.1 and 62.5% rooted shoots. The culture medium supplemented with activated charcoal didn ́t favor the rooting. The largest percentage of surviving plants occured with substrate Plantmax® + rind rice carbonized (56.7%) after four weeks. The micropropagation of imbuia was viable, however it needs more studies to increase the percentage of survival during acclimatization.